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快速检测试纸检测肉类食品安全


摘 要:目的 建立检测肉类食品安全的快速检测方法。方法 使用快速检测试纸检测肉类掺假,以及肉类中残留的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺与沙丁胺醇。结果 使用猪肉检测快速检测试纸,检测羊肉中掺加的猪肉,掺加猪肉的比例为0.75%~25%,可以检出。使用胶体金检测仪结合快速检测试纸,检测肉类中添加的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺与沙丁胺醇,盐酸克伦特罗的平均添加回收率在110%左右,莱克多巴胺的平均添加回收率为90%~120%,沙丁胺醇的平均添加回收率在110%左右。结论 快速检测试纸适合对肉类食品安全进行现场快速筛查。

关键词:快速检测试纸 肉类掺假 盐酸克伦特罗 莱克多巴胺 沙丁胺醇

中图分类号:TS201.6 文献标识码:A 文章编号:1672-3791(2015)11(c)-0209-04

肉类是人们重要的食物来源,肉类食品安全是食品安全中的重点之一。目前,有些商贩在高价肉类中掺入低价肉类,以降低成本,这样很容易引发食品安全问题,甚至可能引发宗教问题与民族矛盾。另一方面,肉类中残留的β-兴奋剂类药物(包括克伦特罗,莱克多巴胺、沙丁胺醇等)则会危害人类健康。因此,建立一种快速准确的检测肉类食品安全的检测方法,用于检测肉类掺假,以及肉类中残留的β-兴奋剂类药物,具有重要意义。

检测肉类掺假的方法,有色谱法[1]、电泳法[2]、聚合酶链式扩增法(PCR)[3]、酶联免疫分析法(ELISA)[4]等。检测β-兴奋剂类药物的方法有高效液相色谱法[5,6]、酶联免疫分析法(ELISA)[7,8]、胶体金免疫层析法[9]等。其中,色谱法与电泳法的操作较繁琐,对操作人员的要求较高,PCR与ELISA的方法反应时间较长。该研究使用胶体金检测仪结合快速检测试纸的方法,不仅检测时间短,而且能够进行定量检测,适合对肉类食品安全进行现场快速检测或筛查。

1 材料与设备

1.1 试剂与材料

猪肉检测快速检测试纸,盐酸克伦特罗快速检测试纸,莱克多巴胺快速检测试纸,沙丁胺醇快速检测试纸,均来自北京普析通用仪器有限责任公司,其他化学试剂购于西陇化工股份有限公司。

1.2 设备

胶体金检测仪(型号:TR3)来自北京普析通用仪器有限责任公司。

2 方法

2.1 肉类掺假检测

前处理步骤:(1)将待测样品均质,称取(0.5±0.01)g均质后的样品;(2)加入3 mL的去离子水(水温为(50±5)℃),剧烈振荡30 s;(3)静置待其自然沉淀,处理后的样品恢复至室温后,取上清液进行检测。

检测步骤:(1)将试纸条水平放置,在试纸条加样处加入100 μL待检测溶液;(2)静置10 min后观察检测结果;(3)结果判断:C线显示红色色带,T线不显示红色色带,判为阴性。C线显示红色色带,T线显示红色色带,无论深浅,判为阳性。C线不显示红色色带,无论T线是否显示红色色带,该试纸均判为无效。

在羊肉中掺加不同比例的猪肉,按照上述步骤进行前处理与检测,记录检测结果。

2.2 猪肉中残留的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇检测

前处理步骤:(1)取4 g匀浆去脂肪肉样(肉泥/去脂肪)于50 mL离心管中,加0.5 mL稀释液,盖紧管盖;(2)将装有样品的离心管放入80 ℃水中水浴5 min,冷却至室温,尽量取出管中液体移至于干净离心管中;(3)4000 r/min离心1 min,取去掉脂肪层的上清液进行检测。

检测步骤:(1)使用待测物质的标准品,配制一系列浓度的标准品溶液,取出检测卡,开封后平放于桌面,将标准品溶液加100 μL于样品孔中。加样后5 min,使用胶体金检测仪读数。将标准品溶液的浓度与T/C(T线深浅和C线深浅的比值),对应输入至胶体金检测仪建立标准曲线;(2)取出检测卡,开封后平放于桌面,将离心管中的上清液加100 μL于样品孔中。加样后5 min,使用胶体金检测仪读数,根据标准曲线计算出浓度值。

在猪肉中添加一定浓度的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇,按照上述步骤进行前处理与检测,每个样品重复检测5次,计算添加回收率与平均值。添加回收率的计算方法:添加回收率 = (样品检测浓度空白样品检测浓度)/ 添加浓度×100%。

3 结果

3.1 肉类掺假

羊肉中掺加猪肉的检测结果见图1,由图1可见,在羊肉中掺加0.75%~25%(质量分数)的猪肉,可以观察到T线。掺加猪肉的比例越高,T线颜色越深。说明该快速检测试纸条可以用于检测羊肉中掺加猪肉,而且较灵敏。

3.2 猪肉中残留的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇

图2为盐酸克伦特罗的标准曲线,在图2中,标准品溶液的浓度分别为:0,0.61,1.25,2.5,5.0 ng/mL。

图3为莱克多巴胺的标准曲线,在图3中,标准品溶液的浓度分别为:0,1.0,1.5,2.5,5.0 ng/mL。

图4为沙丁胺醇的标准曲线,在图4中,标准品溶液的浓度分别为:0,0.2,0.6,1.8,3.0 ng/mL。

猪肉中盐酸克伦特罗,莱克多巴胺,沙丁胺醇的添加回收率见表1。由表1可见,盐酸克伦特罗的平均添加回收率在110%左右,莱克多巴胺的平均添加回收率为90%~120%,沙丁胺醇的平均添加回收率在110%左右。

3.3 胶体金检测仪与目测结果比较

图5为猪肉中添加沙丁胺醇的检测结果,可见,猪肉中添加沙丁胺醇的浓度为3 μg/kg,目测结果为阳性。由表1可见,猪肉中添加沙丁胺醇的浓度为0.2 μg/kg,胶体金检测仪结果为阳性。所以,胶体金检测仪与目测相比,检测灵敏度更高。 4 讨论

该研究使用快速检测试纸检测羊肉中掺加的猪肉,掺加猪肉的质量分数低至0.75%时,可以被检出。该方法灵敏度较高,而且检测时间较短,只需要20 min就能够完成样品处理与检测的全过程,适合用于现场快速筛查。并且,该研究使用胶体金检测仪与快速检测试纸相结合的方法,检测猪肉中添加的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇,与传统的胶体金免疫层析法相比,灵敏度更高,适合用于现场快速筛查。

该研究为研究肉类掺假的基因检测试纸与基因芯片奠定了基础。基因检测试纸的检测原理为,首先提取待检样本的核酸,经过核酸扩增反应,核酸杂交技术,以及胶体金免疫层析检测技术,可以快速地实现对肉类基因的定性检测。因为核酸的热稳定性和酸碱稳定性与蛋白质相比更优,所以,以动物种属间遗传信息的差异作为物种鉴别的检测靶点,具有特异性高,方法便捷,不受组织类别限制等诸多优势,已经成为食品中肉类成分鉴别的重要方法。

基因芯片的技术原理为:核酸分子原位杂交技术,将特别设计的核酸片段作为分子探针,固定在芯片基底上,样品经过处理,核酸聚合酶链式反应(PCR扩增),或体外转录后,与芯片上固定的分子探针反应,样品中基因序列与探针互补的核酸分子就会与探针杂交,形成双链结构,通过一系列检测手段,可以实现对待测样品基因的大规模检测[10]。基因芯片在医疗诊断[11]、病原微生物检测[12]、农业研究[13]、食品安全检测[14]、转基因农作物检测[15]等领域都具有重要的应用价值。

该研究的下一步计划,是研究用于检测肉类掺假的基因芯片。首先,针对待测目标的特异性核酸片段设计引物探针,用于PCR扩增;其次,在基因芯片的PCR区实现PCR扩增;并且,在基因芯片的检测区固定捕获探针,用于检测扩增产物。基因芯片具有高通量,集成化的特点,可以同时鉴别多种肉类的来源,在肉类鉴别与肉类掺假检测方面可以发挥重要作用。

5 结语

该研究使用快速检测试纸检测肉类掺假,操作简便,检测时间短,适合对涉及肉类掺假的食品进行现场快速检测或筛查。并且为研究肉类掺假的基因检测试纸与基因芯片奠定了基础。该研究使用胶体金检测仪结合快速检测试纸的方法,不仅检测时间短,而且能够进行定量检测,提高了结果的灵敏度与准确性,适合对肉类食品中残留的克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇进行现场快速检测或筛查。

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